引言
In silico（计算机模拟）预测与in vitro（体外）实验验证的完美结合，是阐明新型剪接变异致病机制的关键。在一项针对女性不孕症（表现为早期胚胎停育 EDA）的研究中，RDDC RNA剪接预测模型生物信息AI工具通过其精准的预测能力，成功指导了后续的功能实验。该工具对TLE6和NLRP5基因新型剪接变异的预测结果，与迷你基因（minigene）实验的验证结果完全一致，为解析这些"意义未明变异"（VUS）的致病性、指导临床诊断和植入前基因检测（PGT）提供了核心证据。
研究挑战：WES发现不明原因不孕中的剪接VUS
本研究聚焦于两例经历反复IVF/ICSI失败（胚胎停滞于早期阶段）的不孕女性患者。为了探究遗传病因，研究团队对患者及其家属进行了全外显子测序（WES）。结果发现了两组不同的复合杂合变异：
其中，TLE6 c.541+2dupT和NLRP5 c.2957+4A>G均为新型剪接位点变异，在公共数据库中未见报道，属于VUS。要确定这些变异是否是导致患者胚胎停育的原因，必须明确它们对相应基因mRNA剪接的具体影响。
RDDC精准预测：揭示功能丧失性剪接异常
为评估这两个VUS的潜在致病机制，研究人员使用了RDDC RNA剪接预测模型生物信息AI工具。该模型基于先进算法，能够精准预测变异（包括插入/重复和非经典位点变异）可能引发的剪接模式改变。
针对TLE6 c.541+2dupT变异
RDDC预测该变异会导致两种主要的异常剪接后果：外显子7缺失19 bp 或 内含子7保留118 bp。这两种情况均会引发读码框移位和提前终止密码子，导致蛋白截短。
针对NLRP5 c.2957+4A>G变异
RDDC预测该变异会导致两种主要的异常剪接后果：外显子11缺失171 bp 或 外显子10-11共同缺失242 bp。这同样会产生截短蛋白。
RDDC的预测清晰地指向：这两个剪接变异都将通过功能丧失（Loss-of-Function）机制致病，破坏TLE6和NLRP5蛋白（均为亚皮质母体复合物SCMC的关键成员）的正常功能，可能干扰母源mRNA清除和合子基因组激活（EGA），最终导致胚胎发育停滞。
实验验证与临床价值：从预测到精准干预
研究团队迅速通过体外迷你基因（minigene）实验对RDDC的预测进行了验证。实验结果有力地证实了RDDC的预测：
TLE6变异验证结果
对于TLE6 c.541+2dupT，实验观察到了与RDDC预测一致的两种异常剪接产物，分别生成截短蛋白p.Ala175SerfsTer134和p.Gln181ArgfsTer2。
NLRP5变异验证结果
对于NLRP5 c.2957+4A>G，实验验证了导致截短蛋白p.Val906AlafsTer21的异常剪接。
In silico预测与in vitro实验结果的完全一致，为这两个新型剪接VUS的致病性提供了强有力的证据。这一研究不仅扩展了TLE6和NLRP5的突变谱，为EDA的基因诊断提供了新靶点，更重要的是，它展示了RDDC RNA Splicer在辅助解析VUS致病性方面的关键价值，为后续的PGT技术筛选正常胚胎、实现优生优育奠定了坚实的分子基础。
内容来源与免责声明
本文是对以下科学研究的编译和解读，旨在展示 RDDC 生信工具在其中的应用。所有研究数据和结论归原作者和出版物所有。
原始文献：
Li R, Mei M, Zhou L, et al. Biallelic Recessive Mutations in TLE6 and NLRP5 Cause Female Infertility Characterized by Human Early Embryonic Arrest. Human Mutation. 2024 Jun;45(6):e26786.
