引言
在输血医学和遗传学研究中，准确解析罕见的血型亚型及其分子机制至关重要。ABO血型系统的变异，尤其是位于内含子区域的变异，其功能后果往往难以预测。近期一项研究利用PacBio三代测序技术，在一个具有非典型凝集模式（Ael表型）的献血者中发现了一个新型ABO基因内含子变异c.28+5G>A。RDDC在线RNA Splicer工具在该研究中扮演了关键角色，其对该变异剪接效应的精准预测，与后续迷你基因（minigene）实验结果高度吻合，成功揭示了导致Ael表型的分子机制。
研究挑战：一个"意义未明"的内含子变异
该研究的起点是一名Ael表型的健康男性献血者。血清学检测显示其红细胞上A抗原表达极弱。为探究其遗传基础，研究团队采用了PacBio长读长测序技术，发现该献血者携带一个新型杂合变异c.28+5G>A，位于ABO基因的内含子1区域，背景为A2.01等位基因。
这是一个典型的非经典剪接位点变异（+5位），其对mRNA剪接的具体影响未知，属于"意义未明变异"（VUS）。要理解Ael表型的成因，必须阐明这个内含子变异的功能。
RDDC的精准预测：提供可验证的剪接模式
为了在投入实验资源前获得清晰的分子机制假说，研究团队使用了RDDC在线RNA Splicer工具来预测c.28+5G>A变异的潜在剪接后果。RDDC的分析结果非常具体，提出了三种可能的剪接模式：
- 167 bp内含子序列插入：预测该变异会激活内含子中一个隐蔽的剪接供体位点，导致一段167 bp的内含子序列被错误地包含进成熟mRNA。
- 正常野生型剪接：预测仍有部分mRNA可能通过正常的剪接途径产生。
- 外显子跳跃导致40 bp缺失。
这些预测，特别是167 bp插入和正常剪接并存的可能性，为解释Ael表型（极弱A抗原表达）提供了非常有价值的理论基础。
Minigene实验的完美印证
研究团队迅速通过体外迷你基因实验对RDDC的预测进行验证。实验结果有力地证实了RDDC预测的核心内容：
c.28+5G>A变异确实废除了经典的5'剪接供体位点，并激活了下游的隐蔽位点，导致mRNA中插入了167 bp的内含子序列。这种异常mRNA会翻译产生一个截短的、无功能的糖基转移酶。- 同时，实验也检测到了少量通过正常剪接产生的野生型转录本。
In silico预测与in vitro实验结果的高度一致（167 bp插入和正常剪接模式均被证实），明确了c.28+5G>A变异通过干扰mRNA剪接导致Ael表型的分子机制。
案例启示
本案例再次证明，RDDC RNA Splicer是解析内含子VUS（特别是影响剪接的变异）致病机制的强大工具。它能够提供精准、具体的剪接模式预测，有效指导后续的功能实验设计，显著提高了研究效率和诊断准确性，为理解罕见血型亚型的遗传基础提供了重要支持。
内容来源与免责声明
本文是对以下科学研究的编译和解读，旨在展示RDDC生信工具在其中的应用。所有研究数据和结论归原作者和出版物所有。
原始文献：
Ye L, Lin W, Xu X, et al. Characterization of a novel AEL allele harboring a c.28 + 5G>A mutation on the ABO*A2.01 background: a study utilizing PacBio third-generation sequencing and functional assays. Annals of Translational Medicine. 2024 Feb 29;12(4):114.
