Tn(CAG-cas9*-SPH)1Smoc

使用piggyBac转座子系统，我们创造了Cre依赖的SunTag-p65-HSF1（SPH）转基因小鼠，这些小鼠在F1胚胎期的合子中生成，并与野生型C57BL/6小鼠杂交。SPH转基因小鼠中包含了一种带有HA标签的dCas9，它与10xGCN4融合，后者与p65-HSF1和EGFP串联，通过P2A和T2A介导。这种转座子由普遍的CAG启动子驱动，并通过一个loxP-stop-loxP（LSL）载体打断，使得Cas9表达在Cre重组酶诱导下开启。检测dCas9表达的方法是使用兔单克隆抗体（1:1000，#3724，CST45）作为初级抗体，以及羊抗兔Alexa Fluor 488标记的二级抗体（1:1000，#A-11034，Thermo Fisher）。参考文献为J:238766。