TgTn(pb-Gt(ROSA)26Sor/CAG-EYFP*,-tdTomato*,-KDR*,-mEYFP*,-Kdr*,-mKate2*)#Ben

这个等位基因包含三个针对膜的荧光蛋白序列，每个都由不兼容的lox位点对（方向相同）在Gt(ROSA)26Sor基因座的exon 1和2之间插入，位于BAC RP23-401D9的PiggyBAC转座子反向重复元件辅助下。通过PiggyBAC系统，目标向载体设计包括：两个鸡β-球蛋白HS4绝缘子元件(2xINS，增强下游基因表达并减少调控干扰)，CMV-IE增强子/鸡β-actin/兔β-球蛋白融合启动子（来自pCAGGS），loxN位点，lox2272位点，loxP位点，非毒性/非荧光的Phialidium黄色荧光蛋白变异株PhiYFP（带有核定位信号N-PhiMut），牛GHpolyA信号序列，第二个loxN位点，MbTomato基因（非聚合的双二聚体DsRed荧光蛋白变异体tdTomato，带有膜导向标签），Thosea asigna病毒2A切割位点（T2A，介导 ribosomal skipping），接着是编码活性形式的突变人类KDR cDNA（去除了细胞外域序列），牛GHpolyA信号序列，第二个lox2272位点，MbYFP基因（单分子增强黄色荧光蛋白mYFPA206K，带膜导向标签），T2A序列后是突变的mouse Kdr cDNA（p.Y1173F突变使其非磷酸化，绑定VEGF时终止信号传导），牛GHpolyA信号序列，第二个loxP位点，以及MbKate2基因（单分子远红光荧光蛋白mKate2，带膜导向标签），再次两个2xINS序列。来源：(J:252386)