使用了经过基因改造的KOMP靶向ES细胞克隆Th_C09,其中插入了Engrailed的剪接接受器(SA)后面跟着ire-s lacZ基因盒,它们被置于Th基因的第6外显子之后的内含子中。通过双重组酶驱动的 cassette exchange技术,将lacZ等位基因重新工程到了Th-2A-Flpo。构建的靶向载体包含了Th编码序列的7-13号外显子、自启动肽P2A、Flpo、WPRE序列、牛生长激素的polyadenylation信号(bGH pA)以及由rox位点包裹的 puromycin筛选 cassette。这个靶向载体与pDIRE质粒一起,通过电穿孔法导入KOMP ES细胞,并通过 puromycin抗性选择。成功整合到Th位点并经历了RMCE的ES细胞克隆被用来培育杂交小鼠。随后,通过与CAG-Dre转基因小鼠(J:266806)杂交, puromycin筛选 cassette被去除了。
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count