通过Cre重组酶介导的 cassette exchange (RMCE) 方法,生成了在Crhr1启动子调控下的Cre重组酶表达小鼠。构建中包含一个对接位点,从5'至3'顺序有attP位点、loxP位点、FRT位点、剪接接受器、T2A切割位点、tau/lacZ/flag报告基因 cassette、另一个FRT位点、neo cassette、attP位点、PGK启动子和另一个FRT位点,这些被插入到内皮2号染色体的 intron中。attB位点引导的Cre重组酶表达单元包括从5'到3'的Crhr1内皮2至外显子3的融合,以及覆盖4-13号外显子的Crhr1 cDNA,接着是一个带有bGH-pA的ires-Cre cassette,后面跟着frt位点和反向的Pgk1polyadenylation序列以及hygromycin抗性 cassette。通过phiC31整合酶介导的cassette exchange,这个Cre表达单元插入到了右侧的attP位点。生成的胚胎干细胞被用来培育杂交小鼠,最终得到了标记为Crhr1tm4Jde的鼠品系。通过与FLPeR小鼠杂交,tau-lacZ报告基因和hygromycin选择 cassette被去除了(文献来源:J:264526)。
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count