Mecp2^em3Bird

一个靶向载体、sgRNA和CRISPR/Cas9技术被用来对基因位点进行如下修改：插入了loxP位点、抗氨苄青霉素抗性基因座、转录终止子和另一个loxP位点，所有这些都位于内含子2、修改过的exon3、修改过的exon4、GSSGSSG的连接肽序列，以及EGFP基因。ex3的修改是删除了30-87或13-70的编码序列（splice变异体e1和e2）。ex4的改动是用GSSGSSG和SV40核定位序列（PKKKRKV）替换174-271（包括内源性核定位序列NLS）的编码序列，同时删除313-484（大致范围）的序列（splice变异体e2）。这构建了一个条件性敲入突变体，原基因被一个带有MBD和NCor/SMRT互动域之间SV40核定位序列的截短版本替换，后者连接着荧光标记。这个截短蛋白保留了野生型序列的32%。只有在Cre介导的重组去除neo-STOP序列后，这个突变体才会表达这个截短的融合肽。（来源：J:252845）