Igs7^{tm170.1(tetO-GFP*/TPTE2*,CAG-tTA2)Hze}

这个向量设计包含了从5'到3'的方向：一个FRT3位点，两个鸡β-珠蛋白HS4绝缘子元件（用于减少在没有转录激活因子时的报告基因表达），一个Tet响应元件/启动子（TRE2，详情如下），一个由loxP标记的终止子（包含所有三种阅读框的终止密码子，连接到合成的pA-hGHpA-PGKpA），一个ASAP2s绿色荧光电压指示蛋白的序列，带有 soma 和近端树突特异性导向序列（ASAP2s-Kv，详情如下），一个WPRE（增强mRNA转录稳定性），一个BGHpolyA，两个鸡β-珠蛋白HS4绝缘子元件，一个CMV-IE增强子/鸡β-肌动蛋白/兔β-珠蛋白的混合启动子（CAG，来自pCAGGS），一个由lox2272标记的终止子（同样连接到合成的pA-hGHpA-TKpA），一个合成的修饰的四环素响应转录激活器基因（tTA2S），一个WPRE，一个BGHpolyA，一个AttB位点，一个PGK-5'hygro插入片段，一个RNA剪接供体以及一个FRT5位点。使用的TRE2启动子是Tet响应的P>hCMV*-1<，它包含7个拷贝的19bp tet操作子序列（tetO）上游，紧邻一个无增强子的CMV最小启动子（P>min CMV<）。因此，没有tTA或rtTA与tetO结合时，P>hCMV*-1<是沉默的。GFP*/TPTE2*包含了Gallus gallus电压敏感磷脂酶TPTE2的VSD（电压传感器域）序列，包括R154Q变异以实现所需的电压响应。在S3-S4之间插入了环化翻转的超级folder GFP 1-10 OPT变异体（cpsfGFP-OPT）。GgVSD包括R154Q变异，与原始描述中的R153Q等效。GFP 1-10 OPT通过折叠报告GFP的替换（F99S, M153T, V163A, F64L, S65T）和超级folder GFP的变异（S30R, Y145F, I171V, A206V）以及额外的7个替换（N39I, T105K, E111V, I128T, K166T, I167V, S205T）来优化亮度和动态范围，同时保持膜上的高效表达。此外，这个电压传感器还附带了一个65氨基酸的鼠Kv2.1细胞质段，以限制蛋白质定位到细胞体和近端树突。通过Phic31介导的重组，移除了AttB/AttP-开头序列，并替换为重组的AttB/AttP位点（AttL）。(来源：J:260362)