Igs7^{tm136.1(tetO-COP3*/COP4*/EYFP)Hze}

替换载体从5'至3'设计如下：FRT3序列、两个鸡β-珠蛋白HS4绝缘子元件、修改的Tet响应元件/启动子(TRE/tetO)、含三读框终止子的floxed-STOP cassette（与pA-hGHpA-PGKpA人造序列相连）、ReaChR/EYFP序列（细节如下）、WPRE、BGHpolyA、两个鸡β-珠蛋白HS4绝缘子元件、AttB位点、PGK-5'hygro cassette、RNA剪接供体以及FRT5位点。先前在TIGRE中通过FRT3::AttB::PGK-neoR-polyA::FRT5::splice acceptor::3'hygro cassette::SV40 polyA:AttP靶向的胚胎干细胞，现在通过pTRE-LSL-ReaChR/EYFP替换载体和Flp重组酶载体进行重组酶介导的 cassette exchange (RCME)操作。通过Phic31介导的重组，移除了AttB/AttP引导的序列（PGK-Neo-polyA::frt5::RNA splice acceptor::3'hygro-polyA），并替换为重组的AttB/AttP位点(AttL)。ReaChR/EYFP融合蛋白在C端通过G-S-G链接将红激活型通道蛋白ReaChR与增强黄色荧光蛋白(EYFP)融合，ReaChR是一个由Volvox carterichannelrhodopsin 1 (cop3)的A-E和G跨膜域、V. carterichannelrhodopsin 2 (cop4)的F域，以及ChEF/ChIEF变异的N端外膜序列（来自Chlamydomonas reinhardtii的cop3）组成的嵌合通道蛋白。ChEF/ChIEF、VChR1和VChR2序列已优化为哺乳动物密码子，而跨膜域C包含两个突变，I170V以加快关闭速率并保持低失活，L171I则增强对红光(约590纳米)的激活(引用文献：J:101977, J:260362)。