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在 intron 1 和 intron 2 各插入了一个 loxP 突变位点，接着将 Neo 抗性基因座插入其中。通过后续的 Cre 介导重组，删除了 Neo 基因座，形成了一个条件性可操作的等位基因，其中 exon 2 被-loxP 系统标记。之后，通过与含 Cre 等位基因的菌株杂交，创建了一个持续性无表达的纯合突变体。蛋白表达缺失在抗体激活的 B 细胞和 MEF 细胞的 Western blot 实验中得到了确认(来源：J:240453)。