Gt(ROSA)26Sor^{tm1(CAG-CHRM4*,-mCitrine)Ute}

这个靶向载体从5'到3'设计如下：CMV-IE增强子/鸡β-actin/兔β-球蛋白融合启动子(CAG)，一个FRT位点，一个由loxP标记的停泊子(包含所有3个阅读框的终止密码子和三重polyA信号)，一个血凝素抗原标签(HA)，hM4Di序列，猪teschovirus(PTA)的切割位点，mCitrine荧光蛋白，木鼠肝炎病毒的后转录调控元件(WPRE以提高mRNA稳定性)，BGHpolyA信号，以及attB/attP引导的PGK-FRT-Neo-polyA插件。这个完整构建被插入Gt(ROSA)26Sor基因座的1号和2号外显子之间。hM4Di序列是一个由Gi耦联的人类M4型M受体DREADD(设计型受体，仅由设计药物激活)，通过定点突变改造，野生型人类M4受体(CHRM4)序列，包括Y113C/ A203G的替换，这些改变去除了对天然配体乙酰胆碱(ACh)的亲和力，但允许对小分子药物clozapine-N-oxide(CNO)的结合和激活。mCitrine是Citrine YFP的黄色绿色变体，带有A206K变异，pKa值约为5.7，激发波长为516nm，发射波长为529nm。相较于野生型GFP，Citrine有S65G、V68L、Q69M、S72A和T203Y的突变，而mCitrine还额外带有A206K变异以增强其稳定单体的能力。(来源：J:236327)