插入序列编码了一种Cre诱导的、对氯离子浓度([Cl-])敏感、非侵入性的荧光报告器,其Kapp值约为30 mM,能在生理条件下监测pH值(pKalpha 7.1-8.0 pH单位,依赖于[Cl-])。这种被称为Cl-Sensor的分子利用了氯离子对EYFP的淬灭,通过 Förster共振能量转移(FRET)实现活细胞中[Cl-]的比值测量。构建的融合蛋白由增强型 cyan荧光蛋白(ECFP)和一个20氨基酸连接器与增强型 yellow荧光蛋白(EYFP)组成,后者通过三个氨基酸替换(His148Gln、Ile152Leu和Val163Ser)提高了对[Cl-]的敏感性,使其敏感度增加了5倍。靶向载体包含了CAG启动子(包含CMV-IE增强子和鸡β-actin启动子)、腺病毒的剪接起始和接受位点、neomycin抗性基因,5'由反式loxP位点和Kozak consensus序列,3'由牛生长激素基因的两个polyadenylation位点及一个突变的loxP2272位点簇。Cl-Sensor的cDNA后面跟着SV40的polyadenylation序列,反向转录相对于neor基因。这个构建被插入到原始的Gt(ROSA)26Sor靶向载体中,位于原始基因陷阱整合点大约300bp的XbaI酶切位点内。(参考文献:J:209636, J:211025)
Basic Information
(C57BL/6 x 129P2/OlaHsd)F1
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count