Pou5f1^tm1Grc

通过转导重组技术，研究人员操作了一个包含小鼠基因座的BAC。构建的序列在基因启动子上游约3.7kb和下游10.9kb处各有一段同源臂。在基因转录起始点的-277bp位置，加入了两个独立的DNA结合序列数组，分别为12个ZFHD1( TAATGATGGGCG)和5个Gal4( CGGAGTACTGTCCTCCGAG)。核绿色荧光蛋白(GFP)被插入在exon1的起始密码子(ATG)处，之后的2-5号外显子在插入后被删除，以防止内源性Pou5f1的表达。一个可剔除的诺卡因抗性基因座被插入在GFP报告基因之后，用于阳性选择，而胸苷激酶则被插入在同源臂区域，用于负性选择。这些操作参考了(199709, 199710)的研究。