Mbd3^tm2Bh

这种突变体是在胚胎干细胞（ES）中，通过一种选择性负性方法，用Mbd3tm1Bh杂合子产生的，其中1号外显子被LoxP位点包裹。首先，将一个含LoxP标记的hygromycin/thymidine kinase（hyg/tk） cassette插入野生型基因的1号外显子上游。随后，通过携带LoxP标记1号外显子的载体对ES细胞进行重定向，经过两轮6-硫鸟嘌呤处理，筛选出了hyg/tk标记的1号外显子被替换成可删除的外显子的细胞。对这种含删除外显子的杂合ES细胞和Mbd3tm1Bh野生型的核提取物进行免疫印迹分析，使用MBD3抗体，结果显示了正常蛋白亚型的表达，其中一种（称为Mbda）包含完整的甲基-CpG结合域（MBD），另一种（Mbdb）缺失1号外显子的N端部分。在Cre重组酶介导去除1号外显子后，两种亚型都无法检测到。（来源：J:106974, J:167984）