将金黄荧光蛋白(Venus yellow fluorescent protein, Venus YFP)的编码序列与Id1基因3'端的Id1编码序列通过一个10氨基酸的柔性连接肽(GSAGSAAGSG)相连,构建出Id1/YFP融合蛋白。插入操作后,内源性3'非翻译区未受影响,仍作为polyadenylation序列使用。FRT-Neo-FRT选择性标记片段被插入到Id1基因改造后的下游477bp位置。使用CY2.4 ES细胞(来自C57BL/6纯系的白化品系)进行靶向。南方 blot筛选出的ES细胞克隆被注入同源的B6J囊胚。阳性杂交胚胎被与白化B6J雌性杂交。白化幼崽通过PCR进行基因型鉴定,阳性个体再与B6 ACTB::FLPE小鼠(阿瑞米斯制药公司)杂交,以体内移除Neo片段。(参考文献J:154023)
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count