这个突变体的构建使用了含有PGK-Neo筛选 cassette的loxP位点靶向载体。这个筛选元件被插入到目标基因的第四外显子下游,同时在第四外显子上游也插入了另一个loxP位点。载体通过电穿孔技术导入了129S4/SvJae来源的J1胚胎干细胞。杂交后,这些小鼠与C57BL/6NTac雌性鼠交配三代,然后纯合化。接着,这些小鼠与(B6129S)F1/J交配,产生的F2代再进行交配以产生携带删除等位基因的纯合子。最后,这些小鼠与表达Cre重组酶的转基因小鼠(携带B6;129背景的Tg(Cdh5-cre)1Spe和VEC-cre基因)杂交(J:90431)。
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count