野生型Hesx1的编码序列通过PCR被改造,使其第160位的Arginine变为Cysteine(CGA->TGC)。在靶向载体中,一个含LoxP位点的PGK-Neo选择性 cassette被插入到突变Hesx1序列的首内含子。PGK-Neo的表达方向相对于正常转录方向是反向的,以期降低突变基因在Hesx1基因活跃的ES细胞中可能产生的显性负作用。在CCE ES细胞中,同源重组将野生型序列替换为靶向载体中的突变序列。F1代动物与Actin-beta-cre小鼠杂交,以剔除PGK-Neo cassette。(来源:J:142649)
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count