使用了两个靶向载体,分别在Snord116基因簇的上游和下游插入了loxP位点(以及Frt1介导的PGK-neo选择标记片段和Frt5介导的puromycin抗性/TK片段)。上游载体转染到了C57BL/6来源的胚胎干细胞(ES细胞),经过筛选,得到的正确靶向的ES细胞再转染下游载体。随后,双靶向的ES细胞短暂转染一个表达FLP的质粒,以去除这两个选择性标记。最终得到的2-loxP ES细胞是在Snord116基因簇上游和下游各有一个loxP位点的(来源:J:131427)。
Legend:
cx: complex: > 1 genome feature ot: other: hemizygous, indeterminate,... (F): Female
(M): Male
N: normal phenotype
(#): related diseases count