ABO基因背景新型AEL等位基因

一、研究背景与目的

ABO血型系统对输血、器官移植等意义重大，其基因突变为血型亚群成因。本研究借助 PacBio 三代测序与功能分析，对 ABO*A2.01 背景下携带 c.28+5G>A 突变的新型 AEL 等位基因展开表征，探究其致 Ael 表型的分子机制，为解析血型亚群的遗传基础提供新视角。

二、研究方法

选取 1 名 53 岁非典型凝集模式的健康男性献血者，采集 EDTA 抗凝标本。通过标准血清学方法（正向 / 反向分型、吸收洗脱试验）确定血型表型；采用 PacBio 三代测序技术对 ABO 基因全序列（含侧翼调控区）进行长读长测序；结合 SDScore 算法、RDDC 在线 RNA Splicer 工具等预测突变对剪接的影响；设计 minigene 剪接试验，通过质粒构建、细胞转染及 RT-PCR 验证突变导致的异常剪接模式。

三、研究结果

（一）血清学结果

先证者红细胞与抗A、抗B等无反应，但与抗H强凝集，血浆可凝集A₁和B细胞，吸收洗脱试验证实红细胞存在A抗原，确定为Ael表型。

（二）基因测序与分析

PacBio测序显示，先证者为ABO*O.01.02与新型ABO*A2.01样等位基因杂合子，后者内含子1存在c.28+5G>A突变。RDDC 工具预测该突变可引发三种剪接模式：167 bp 插入（激活隐蔽供体位点）、正常野生型剪接及外显子 40 bp 缺失跳跃，为后续功能验证提供理论基础。

（三）功能验证

minigene试验表明，c.28+5G>A突变废除了内含子1经典5’供体剪接位点，激活下游隐蔽位点，导致mRNA插入167 bp，产生截短糖基转移酶，丧失催化功能；同时，少量野生型转录本通过正常剪接生成，共同导致 A 抗原表达极弱的 Ael 表型。试验结果与工具预测的167 bp插入及正常剪接模式吻合，证实了RNA Splicer工具在突变剪接效应预测中的有效性。

四、研究结论

研究在中国男性献血者中鉴定出新型AEL等位基因，其在ABO*A2.01背景下因c.28+5G>A突变致mRNA异常剪接与截短蛋白，首次揭示该突变通过破坏剪接机制引发Ael表型，扩展了 ABO 血型系统的突变谱，为临床血型精准分型及输血安全提供了分子依据。

RDDC网站上的AI工具在每次预测时均会进行全新计算，因此不同次的预测结果并非固定不变。